下面咱们主要从样本原因进行分析
1、样本污染
   主要发生在细胸样本中;细胞的交叉污染、分化和传代次数过多都会导致下游wvb实验易产生杂带。
解决方法:

                a、用带有STR鉴定的细胸进行实验；

                b、细胞惨代次数不宜过多，尽量在20代以内；

                c、烟胞培养时避免产生交叉污染;)、

                d、加药处理时，使用过滤处理过的药物。

2、提蛋白问题
    蛋白样品由于加的还原剂量不足城没加而导致蛋白还原不彻底，以二体或多聚体存在，形成分子量更大的杂带，目的蛋白降解并在附近出现很近(很近的两条)的杂带。

解决方法:

①、蛋白变性时，上样缓冲液(loading buffer)中需要含100mM的DTT;

②、为防止蛋白降解需要在裂解液中加入1mM的PMSF和1mM的钒酸钠，并在低温下操作;

③、提好的蛋白尽量使用新鲜，不得已长期保存时尽量保存在-80℃，避免反复冻融;
④、样本保存时间不宜过长，如果超过半年尽量保存在-80℃，再取用时需另外加入loading buffer煮沸，上样前需3000r离心1min，取上层部位点样;

3、特殊样本干扰
血液里的 lgG 被二抗识别而出现杂带。1gG的重链和轻链在电泳过程中分离，且刚好该lgG与一抗同源，均被二抗识别面出规杂带；一般重猛条带在55 kDa 左右，轻链在25kDa 左右；样本里还有脑肪物质时，一般会漂
浑在样本上层，若点样设避开，也会结合产生杂带。

解决方法

①、在一些含脂肪量比较高的样本中(如肠组织)，裂解完毕后需要避开上层漂浮油脂，将明亮上清转移到新的EP管中进行后续操作;
②、处理含血较多的样本(心、肝、脾、肾)，处理时需用预冷的PBS清洗干净。

4、蛋白本身存在多种修饰或剪切体
很多时候我们要检测的目的蛋白中会存在泛素化、糖基化等多种修饰会让蛋白的条带发生较大的偏移;出特殊修饰外，剪切体的产生也会导致检测蛋白出现多条目的带。

解决方法
在实验前需查询文献或者搜索数据库以确定该蛋白是否产生蛋白修饰及剪切体。

5、产生胰蛋白酶切

产生胰蛋白酶切样品制备时，我们一般会使用胰蛋白酶消化一下细胞，此时有一些目的蛋白会被剪切成短片段，而这些短片段通常会被识别，从而出现杂带。

解决方法
针对该类样本，不要使用蛋白酶消化，可以改用刮刀收集或直接加裂解液到细胞皿或细胞瓶中直接裂解。

6、其他方面影响

解决办法
①、检查所用样本是否有过被外源进去带有标签的靶标蛋白。如有，更换细胞系样本;
②、摸索合适的上样量