树突状细胞（Dendritic cells, DC）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells, APC)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，是唯一能够显著刺激初始T细胞增值的抗原呈递细胞 （其他种类的APC如单核巨噬细胞，B细胞等仅能刺激已活化的或者记忆性的T细胞）。因此DC细胞是适应性T细胞免疫应答的唯一始动者，在肿瘤免疫中发挥着及其重要的作用。

     树突状细胞起源于造血干细胞，按其来源分化途径被分为淋巴和髓系两类。髓系分化途径最终分化为朗格汉斯细胞和间质树突状细胞两个亚群。淋巴系分化途径最终分化为类浆细胞DC。根据发育成熟状态，分为未成熟DC (immatureDC, im-DC)、成熟DC (matureDC, mDC)和半成熟DC(semi-matureDC, smDC)。成熟的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。

虽然DC存在于体内多种组织中，但含量很少，无法满足科研和临床治疗的需求，需要在体外培养和扩增DC。对于小鼠，常用的方法是从骨髓细胞诱导获得DC，即骨髓来源的树突细胞。

培养步骤

一、小鼠骨髓树突状细胞的获得

1、小鼠颈椎脱臼法处死，取出股骨和胫骨，去除骨周围的肌肉组织；

2、股骨和胫骨移入DMEM的培养皿中，用剪刀剪去骨两端，用针头反复冲洗骨髓至培养皿中，直至骨完全变白；

3、收集骨髓细胞悬液，过200目筛网；

4、收集滤液，1500rmp离心5min，弃上清；

5、加入2-5ml红细胞裂解液，室温孵育3-5min；

6、红细胞裂解结束，PBS洗2次，用完全培养液重悬细胞；

二、小鼠骨髓树突状细胞诱导

1、调整细胞密度，铺六孔板，每孔2ml细胞悬液；放入培养箱培养；

2、每2天轻轻摇晃培养板，然后更换新鲜培养液；

3、第6天可收获未成熟DC细胞（也可以继续诱导成熟DC细胞）；

4、收集细胞，1200rmp离心5min，弃上清；

5、调节细胞浓度，使用完全培养基重悬细胞，并加入TNF-a诱导；

6、37℃，5%CO2培养箱培养2天；

7、收集悬浮细胞及疏松贴壁生长的细胞即为成熟树突状细胞。

注意事项

BMDC逐渐由贴壁细胞变成半悬浮，悬浮状态生长，当BMDC悬浮生长后，换液时吸走的培养液中会带走一定量的BMDC，可将其离心后，再置于培养液中继续培养，避免DC的损失浪费。